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PeproTech重組細胞因子常見問題解答

PeproTech公司的重組細胞因子產品經過了十分嚴格的生產、純化及質檢過程,保證其在投放市場之前,達到如下要求:
1. 真實性:重組蛋白產品一致經過N末端氨基酸序列分析;必要時應用SDS-PAGE, RP-HPLC和質譜(MS)檢測其真實性。
2. 純度:應用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產品純度。
3. 生物活性:進行相應的體外(in vitro)或體內(in vivo)活性檢測。
4. 蛋白含量:通過紫外光譜分析,SDS-PAGE電泳檢測;必要時應用HPLC定量標準蛋白溶液。
5. 內毒素:kinetic LAL法檢測內毒素。
6. 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經過濾除菌處理。
產品隨附的說明書上載有產品的各項相關信息。請仔細閱讀這些信息,了解其配制和貯存提示。如果在閱讀說明書后仍需更多信息,請查看以下常見問題解答,或致電我們的技術服務部門。
 
重組細胞因子的凍干狀態
      與市場上已有的其他蛋白產品不同,PeproTech細胞因子不含carrier protein或其他添加物(如BSA、HAS、蔗糖等),而是以低鹽的形式做凍干處理,因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內,
形成很薄或不可見的蛋白層。PeproTech的質控過程確保每管裝有非常準確量的蛋白產品。所以我們建議在收到試劑后,務必于開蓋前先離心20-30秒,使可能附于管蓋或管壁的蛋白成分聚集于管低(此時能否見到白色沉淀均屬正常現象)。
重組細胞因子活性單位(units)的換算
        各公司在開發出重組細胞因子并檢測其活性后,通常會以ED50(半數有效濃度)或units(活性單位)來標識其細胞因子的生物活性。因此1mg細胞因子中所含的活性單位(units)可以理解為將1mg/ml細胞因子原液稀釋成ED50的稀釋倍數,
以下是二者的換算公式:
                                                                                      1x106
                                                                          _______________     = specific activity (units/mg)
                                                                                 
                                                                                ED50(ng/ml)
重組細胞因子的穩定性
        除非產品說明書上另有特別說明,否則所有PeproTech蛋白產品都為凍干粉形式,在室溫下也能保持很好的穩定性。但是,我們推薦凍干產品最好保存于-20℃。大多數凍干產品經溶解和稀釋后,可短時間保存于4℃;若要進行較長時間保存,
我們建議稀釋到工作液濃度并加入一定的carrier protein(如0.1% BSA),然后分裝保存于-20℃。請注意每一次凍融過程都會造成蛋白的部分變性,應避免反復凍融。
重組細胞因子的交叉活性
        除了少數例外,大多數人類細胞因子對小鼠細胞都有活性。許多小鼠細胞因子對人類細胞也有活力表現,但是與相應的人類細胞因子相比比活力較低。一些人類的細胞因子如IL-7在小鼠細胞中甚至表現出比相應的小鼠細胞因子更高的比活力。
而干擾素、GM-CSF、IL-3 和IL-4 是物種特異性的,對于非人類細胞幾乎沒有活性。相反,成纖維細胞生長因子 (FGFs) 和神經營養因子 (neurotrophins) 是高度保守的,在其它的動物物種細胞中也能表現很好的活性。

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