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雜交瘤細胞的保存方法

(一)保存
    當獲得產生所需的單克隆抗體的雜交瘤細胞后,必須將一部分雜交瘤細胞保存,否則在連續傳代的過程中,可能產生突變或染色體的漂移以至喪失固有特性或丟失產生抗體的特性。另外在長期的培養過程中,難免不發生污染以至于毀滅。所以必須冷藏保存一部分。保存方法如下:
 
1.材料
(1) 細胞:取對數生長期的細胞。
(2) 10%二甲基亞砜保護液(二甲基亞砜能損壞濾器,而又被高壓所破壞,所以不能過濾或高壓消毒。其本身就是毒品,無菌):含10%二甲基亞砜、20%滅活胎牛血清,70%RPMI—1640液。
(3) 20%FCS—1640培養液:含青霉素100U/ml,鏈霉素100μg/ml。
(4) 滅菌的2ml安瓶等
 
2.操作方法
(1) 去掉細胞培養瓶中的舊的培養液,加入10%FCS—1640液,使細胞懸浮。
(3) 1 000r/min離心10min,去上清。細胞沉淀用10%二甲基亞砜保護液制成懸液,使成1.0×107細胞/ml。
(3) 取樣,臺盼蘭染色,計數活細胞,應在95%以上。
(4) 用注射器將細胞分裝安瓶,每瓶0.5ml~1.0ml,熔封安瓶。
(5) 放4℃ 2h。
(6) 放液氮罐氣態部分(-70℃)15h。
(7) 轉入液氮部分。
 
(二)復蘇
1.從液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶。
2.無菌操作打開安瓶,取出細胞懸液,轉入組織培養瓶。
3.逐滴緩慢加入20%FCS-1640培養液3.5ml,這個過程延續3min。
4.5%CO2飽和濕度,37℃培養。
5.4h后棄去培養液上清,加入新鮮的20%FCS-1640培養液。
6.繼續培養,換液,以至形成單層。

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